藥丸劑是藥材細粉或藥材提取物加適宜粘合劑或輔料,制成的球形或類球形的固體制劑,是中成藥古老的劑型之一。PCR的DNA檢測方案正在成為中藥材真偽鑒定的金標準,但是加工后的中藥丸由于成分復雜,包括粘合劑和輔料對PCR反應有抑制作用,導致DNA檢測方法不能有效應用于這個領域。本試劑盒通過自主開發的DNA提取方法,對一些PCR抑制成分進行有效的清洗,從而達到有效的DNA提取純度。提取的DNA可直接用于PCR反應,為藥材的真偽鑒定和摻假檢測提供了一個可靠的檢測方案。
裂解處理:
將丸劑研磨成粉末,加入含蛋白酶K的裂解液(如CTAB緩沖液),56℃水浴1-2小時,破壞細胞膜并降解蛋白質。若樣本含多糖,可加入β-巰基乙醇抑制干擾。
吸附純化:
磁珠法:將裂解液與磁珠混合,DNA特異性吸附后,用含離液鹽的洗滌液去除雜質。
離心柱法:裂解液過硅膠膜柱,DNA結合后,用乙醇洗滌鹽分和色素。
洗脫與質檢:
用TE緩沖液或無菌水洗脫DNA,紫外分光光度計檢測A260/A280比值(1.8-2.0為合格)。電泳觀察條帶完整性,避免拖尾或彌散。
注意事項:
操作全程戴手套,避免DNA酶污染。
多糖含量高時,可增加洗滌次數或使用低pH值法。
陳舊樣本需延長裂解時間。